定向胞内释放NO的半乳糖缀合物及其对HeLa细胞的抑制作用

摘要

目的研究糖基化NO供体-二醇二氮烯翁(diazeniumdiolate,NONOate)与β-半乳糖(β-galactose)的缀合物β-Gal-NONOate(β-galactosyl-diazeniumdiolate)在肿瘤细胞中的NO释放及其对癌细胞的抑制效应.方法采用阳离子脂质体介导法,将真核表达载体pcDNA3-LacZ转染到HeLa细胞中;经G418(neomycin)筛选,以邻-硝基苯-β-D-半乳糖苷(ortho-nitrophenyl-beta-D-galactopyranoside,ONPG)法进行β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性检测,获得稳定表达β-半乳糖苷酶的HeLa细胞株;通过Griess方法比较β-Gal-NONOate与NONOate在HeLa/LacZ+ 细胞和HeLa细胞中NO的释放量,根据细胞克隆形成率、细胞计数和MTT法比较β-Gal-NONOate与NONOate对细胞的作用.结果β-Gal-NONOate在HeLa/LacZ+细胞中NO的释放量和细胞毒性明显高于NONOate(P<0.05),而在未转染LacZ基因的HeLa细胞中比较稳定(P>0.05).结论β-Gal-NONOate是一个成功的定向胞内释放的NO供体,可作为研究中的新型探针,并可能在抗肿瘤治疗中发挥作用.