β-半乳糖苷酶

摘要： 背景:衰老导致神经元形态缺失及功能下降,从而成为引发神经退行性疾病最重要的危险因素。目前对神经元衰老机制的研究尚不完善,体外衰老模型的建立将促进研究进展。背根神经节作为少数成熟的哺乳动物神经元,具有易于分离进行体外培养的优点,因此成为建立体外衰老模型的合适目标。目的:探索合适的诱导神经元衰老的条件,建立体外H_(2)O_(2)诱导神经元衰老的模型。方法:从1月龄的ICR小鼠体内获取背根神经节进行体外培养,分别加入10,20,50μmol/L的H_(2)O_(2)刺激细胞1 h和2 h。通过检测β-半乳糖苷酶的活性及神经元的细胞存活率,筛选诱导细胞衰老的合适条件。然后通过检测该诱导条件下自噬相关蛋白SQSTM1/p62的表达水平、活性氧的水平以及神经元的轴突生长能力,来进一步验证该条件可成功诱导神经元衰老,从而成功建立神经元的体外衰老模型。结果与结论:①通过检测β-半乳糖苷酶活性及神经元的存活率筛选出10μmol/L-2 h可作为合适的诱导条件;②10μmol/L-2 h的条件可使自噬受体SQSTM1/p62的表达量下降(P<0.01),符合细胞衰老的特征;③10μmol/L-2 h的条件下,活性氧的产生明显增加(P<0.01),表明线粒体功能受损,细胞衰老;④10μmol/L-2 h的条件下,神经元轴突生长能力明显变弱(P<0.001),符合神经元衰老的特征;⑤结果说明,10μmol/L-2 h的H_(2)O_(2)可成功用于神经元体外衰老模型的建立。

摘要： 目的:研究玉竹多糖(Polygonatum odoratum polysaccharides,POP)对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5)衰老的保护作用。方法:采用水提醇沉法提取POP,并通过苯酚-硫酸法测得POP中总糖含量。应用D-gal建立A7r5细胞衰老模型,采用MTT法、β-gal染色、活性氧(ROS)、JC-1染色法检测POP对D-gal诱导A7r5细胞衰老的保护作用。结果:POP多糖得率为8.23%,总糖含量为76.48%±0.036%。MTT结果显示POP在400μg/mL处理A7r5细胞24 h可促进细胞增殖,细胞存活率为174.89%±3.30%。40 mg/mL D-gal处理A7r5细胞48 h可降低细胞存活率至65.93%±1.63%。POP浓度为100μg/mL时对D-gal诱导A7r5细胞存活率下降的保护作用最为显著,与对照组相比细胞存活率可达到226.87%±12.58%(P<0.001)。POP可减少Dgal诱导A7r5细胞产生的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)含量,抑制衰老细胞中ROS水平,增加JC-1荧光染色阳性细胞数,保护线粒体膜电位稳定。结论:POP可以抑制氧化应激,抑制D-gal诱导A7r5细胞衰老,具有良好的体外抗衰老作用。

摘要： 目的网络药理学筛选益气补肾调脂方(Yiqi-Bushen-Tiaozhi formula,YBTF)治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的机制;体内实验完成验证。方法TCMSP数据库、HPLC-MS明确YBTF成分、靶点;GSE89632数据集,筛选NASH与正常组差异基因;GeneCards、Disgenet数据库筛选疾病基因。交集为YBTF治疗NASH的靶基因。基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、疾病本体论(Disease Ontology,DO)富集分析,蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)、拓扑分析,明确治疗NASH关键基因。分子对接(molecular docking)预测活性成分、靶点能否结合,发挥疗效;油红O、HE染色检测肝脏脂肪变、炎症;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)检测肝细胞衰老;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR),蛋白质免疫印迹法验证靶基因mRNA、蛋白表达。结果YBTF可调控周期依赖性激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)改善细胞衰老,治疗NASH。结论网络药理学结合实验可为研究YBTF治疗NASH的机制提供新的思路。

摘要： 低聚半乳糖(GOS)是一种广泛存在于人类母乳中的天然功能性食品成分,通过β-半乳糖苷酶(β-gal)酶法生产是目前商业上最重要的GOS来源。β-gal是一类重要的糖苷水解酶,具有水解和转糖苷功能。由于β-gal来源和应用方式的复杂性,对应的GOS产物在结构和纯度上有很大差异,因此,以高产高纯度GOS为导向的β-gal研究一直受到广泛关注。本综述从机理分析,酶种来源,催化方式角度出发,比较不同来源和应用方式的β-gal在催化GOS合成过程的表现,在此基础上展望β-gal在GOS生产中的应用发展方向。

摘要： 为了研究乳克鲁维酵母中β-半乳糖苷酶可能的熔解温度,采用分子动力学模拟的方法,分别对4种不同温度条件下(35、50、65、80°C)的β-半乳糖苷酶进行了50 ns的计算模拟,分析了酶的构象变化以及酶活性中心的差异。研究在原子水平揭示了β-半乳糖苷酶的温度耐受等关键信息:35°C为最适酶活温度,该温度下的β-半乳糖苷酶的整体构象最稳定;该酶在50°C时的原子波动性显著增加,表明此温度可能趋近熔解温度临界值;蛋白在大于65°C条件下丧失柔性,说明蛋白已经变性;进一步的构象分析发现80°C高温会破坏β-D-半乳吡喃糖(GAL)结合位点微环境。

摘要： [目的]以β-半乳糖苷酶脂质体的直径、分散系数(PDI)和Zeta电位为检测指标,联合透射电子显微镜法,创建一种利用脂质体模拟细胞膜筛选冷冻干燥保护剂的模型,从而快速筛选出瑞士乳杆菌冷冻干燥保护剂,有效提高乳酸菌冻藏菌种的活性。[方法]拟采用800 W功率超声10 min的方法来获取优质β-半乳糖苷酶脂质体,添加不同的冻干保护剂后进行冻存。以冻干脂质体水解后β-半乳糖苷酶渗透率为评价指标,评价冷冻干燥保护剂的保护效果。[结果]海藻糖浓度为100 mg/L、透明质酸浓度为2 mg/L时,β-半乳糖苷酶渗透速率最慢。选取瑞士乳杆菌9(LH-9)对上述结果进行验证,发现冻干保护剂对LH-9有同样的保护作用。[结论]该研究为今后乳酸菌冻干保护剂的筛选研究提供新思路。

摘要： β-半乳糖苷酶催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,是乳制品加工中重要的酶。该研究将微泡菌ALW1菌株的β-半乳糖苷酶在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达和纯化,研究其酶学性质。结果表明,微泡菌ALW1的β-半乳糖苷酶属于GH1家族,利用Ni-NTA Agarose亲和层析获得的重组β-半乳糖苷酶分子量约为64 ku。重组酶的最适反应温度为30°C,最适pH为4.5。温度低于25°C、pH 4.0~5.0条件下,β-半乳糖苷酶具有良好稳定性。重组β-半乳糖苷酶对DTT、吐温20和吐温80具有良好的耐受性;离子型去垢剂SDS和CTAB存在时,β-半乳糖苷酶几乎丧失活性。重组β-半乳糖苷酶的Km和Vmax分别为10.98 mmol/L和7.48 U/mg。结构模拟显示,微泡菌β-半乳糖苷酶的催化酸/碱残基和亲核残基分别为Glu186和Glu370。该研究为来自微泡菌ALW1的β-半乳糖苷酶在食品领域的应用奠定理论基础。

摘要： 本文以乳糖为起始原料,在单因素实验的基础上,结合响应面分析法考察加酶量、反应温度、反应时间、反应pH等因素对低聚半乳糖总产率和低聚半乳四糖产率的影响,优化β-半乳糖苷酶法制备低聚半乳糖工艺。结果表明,β-半乳糖苷酶法制备低聚半乳糖的最佳工艺参数为起始乳糖浓度300 g/L、加酶量8.25 U/g乳糖、反应温度49°C、反应时间16 h、反应pH5.6。在此条件下,低聚半乳糖总产率为14.61%,低聚半乳四糖产率为3.31%。该方法针对性提高高聚合度低聚半乳糖的产率,可为低聚半乳糖的功能性应用及特医食品的研发提供参考。

摘要： 低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)是一种具有天然属性的功能性低聚糖,因其优良的益生功能以及在高温和低pH下较高的稳定性而被广泛应用于婴幼儿奶粉等食品中,其主要由β-半乳糖苷酶以乳糖为底物进行生产。为了将具有更高转化率的β-半乳糖苷酶应用于食品领域,该研究首次将Bacillus circulans来源的β-半乳糖苷酶β-Gal-Ⅱ在Bacillus subtilis中进行了异源表达,并对其酶学性质、GOS的制备进行了测定,同时为了降低其工业化应用成本,对重组菌在摇瓶及3-L罐的发酵条件进行了优化。结果表明,重组β-Gal-Ⅱ制备GOS的最适作用条件为50°C、pH 5.0,该条件下GOS转化率在8 h可达最高值60.32%;在摇瓶的发酵条件优化中,以安琪酵母粉和玉米浆干粉各7.5 g/L为复合氮源时,总酶活力最高,可达6.82 U/mL,是TB发酵的1.5倍,单一氮源发酵的2~2.5倍;在3-L罐上进行了33、37°C两个温度的发酵优化,37°C发酵产量优于33°C,最终总酶活力可达138.3 U/mL,是摇瓶发酵的20.3倍。该研究为GOS的工业化生产提供技术基础。

摘要： 定向进化米曲霉β-半乳糖苷酶(AoBgal35A),以提高其水解乳糖的效率,通过易错PCR构建米曲霉β-半乳糖苷酶的突变体文库,高通量筛选水解乳糖效率高的突变体,将其在毕赤酵母中高效表达,并用于制备无乳糖牛奶。筛选得到一个正向突变体(mAoBgal35A),经高密度发酵酶活力达4760 U/mL。纯化后,mAoBgal35A的最适pH和温度分别为5.0和55°C,比野生型AoBgal35A分别提高了0.5和降低了5°C。mAoBgal35A在室温下能高效水解牛奶中的乳糖,加酶量为2 U/mL时,水解72 h后牛奶中的乳糖质量浓度为0.38 g/dL,达到无乳糖牛奶标准。而野生型AoBgal35A的加酶量为20 U/mL时,在相同条件下水解后,乳糖质量浓度为0.6 g/dL。由此表明,定向进化明显提高了米曲霉β-半乳糖苷酶水解乳糖的效率,所得正向突变体在制备无乳糖乳品中具有很大的应用潜力。

摘要： 为了获得具有较高酶活力的β-半乳糖苷酶,以乳糖为诱导剂,采用涂有x-gal的鉴别平板分离初筛得到28株生长较好的产β-半乳糖苷酶的菌株.通过摇瓶复筛测定其水解酶活从中筛选出4株酶活力较高菌株,并利用高效液相色谱检测菌株的转糖基活性,确定了1株具有转糖苷活性菌株B5582Y,其水解初始酶活可达12U/mL.根据细胞形态、生理生化数据、16S rDNA序列和rpoB功能基因序列数据多项鉴定分析,最终确定该菌B5582Y为克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis)。

摘要： 为了获得具有较高酶活力的β-半乳糖苷酶,以乳糖为诱导剂,采用涂有x-gal的鉴别平板分离初筛得到28株生长较好的产β-半乳糖苷酶的菌株.通过摇瓶复筛测定其水解酶活从中筛选出4株酶活力较高菌株,并利用高效液相色谱检测菌株的转糖基活性,确定了1株具有转糖苷活性菌株B5582Y,其水解初始酶活可达12U/mL.根据细胞形态、生理生化数据、16S rDNA序列和rpoB功能基因序列数据多项鉴定分析,最终确定该菌B5582Y为克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis)。

摘要： 为了获得具有较高酶活力的β-半乳糖苷酶,以乳糖为诱导剂,采用涂有x-gal的鉴别平板分离初筛得到28株生长较好的产β-半乳糖苷酶的菌株.通过摇瓶复筛测定其水解酶活从中筛选出4株酶活力较高菌株,并利用高效液相色谱检测菌株的转糖基活性,确定了1株具有转糖苷活性菌株B5582Y,其水解初始酶活可达12U/mL.根据细胞形态、生理生化数据、16S rDNA序列和rpoB功能基因序列数据多项鉴定分析,最终确定该菌B5582Y为克雷伯氏菌(Klebsiella michiganensis)。

摘要： β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)属于糖苷水解酶,由β-半乳糖苷酶基因编码,是由4个亚基组成的四聚体,一般可催化乳糖分解为一分子的葡萄糖和一分子的半乳糖,是糖链结构分析中的重要工具酶.Akkermansia muciniphila(DSM22959),发现于2004年,是一种人体肠道益生菌,属于革兰氏阴性严格厌氧菌,能够使用肠粘蛋白和上皮黏液层的高糖基化蛋白作为其唯一的碳源和氮源.

摘要： β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)属于糖苷水解酶,由β-半乳糖苷酶基因编码,是由4个亚基组成的四聚体,一般可催化乳糖分解为一分子的葡萄糖和一分子的半乳糖,是糖链结构分析中的重要工具酶.Akkermansia muciniphila(DSM22959),发现于2004年,是一种人体肠道益生菌,属于革兰氏阴性严格厌氧菌,能够使用肠粘蛋白和上皮黏液层的高糖基化蛋白作为其唯一的碳源和氮源.

摘要： β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)属于糖苷水解酶,由β-半乳糖苷酶基因编码,是由4个亚基组成的四聚体,一般可催化乳糖分解为一分子的葡萄糖和一分子的半乳糖,是糖链结构分析中的重要工具酶.Akkermansia muciniphila(DSM22959),发现于2004年,是一种人体肠道益生菌,属于革兰氏阴性严格厌氧菌,能够使用肠粘蛋白和上皮黏液层的高糖基化蛋白作为其唯一的碳源和氮源.

摘要： β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)属于糖苷水解酶,由β-半乳糖苷酶基因编码,是由4个亚基组成的四聚体,一般可催化乳糖分解为一分子的葡萄糖和一分子的半乳糖,是糖链结构分析中的重要工具酶.Akkermansia muciniphila(DSM22959),发现于2004年,是一种人体肠道益生菌,属于革兰氏阴性严格厌氧菌,能够使用肠粘蛋白和上皮黏液层的高糖基化蛋白作为其唯一的碳源和氮源.

摘要： β-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物和微生物中.它能水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖,有的β-半乳糖苷酶还具有转糖苷能力,以乳糖为底物合成低聚半乳糖.从土壤中筛选得到一株产β-半乳糖苷酶较优菌株,鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)L709.对该菌株进行产酶条件优化,通过单因素试验,确定最佳产酶培养基组成为(g/L):乳清粉20,蛋白胨10,酵母提取物5,NaC15,MgSO4·7H2O0.5,KH2PO40.75.最佳产酶培养条件为:30°C培养60h.经优化后酶活达到11.49U/mL,与优化前比较提高了2.5倍.通过对其水解与转糖苷进程的研究,发现当底物浓度为20％时,反应12h后低聚半乳糖合成量达到最大.

摘要： β-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物和微生物中.它能水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖,有的β-半乳糖苷酶还具有转糖苷能力,以乳糖为底物合成低聚半乳糖.从土壤中筛选得到一株产β-半乳糖苷酶较优菌株,鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)L709.对该菌株进行产酶条件优化,通过单因素试验,确定最佳产酶培养基组成为(g/L):乳清粉20,蛋白胨10,酵母提取物5,NaC15,MgSO4·7H2O0.5,KH2PO40.75.最佳产酶培养条件为:30°C培养60h.经优化后酶活达到11.49U/mL,与优化前比较提高了2.5倍.通过对其水解与转糖苷进程的研究,发现当底物浓度为20％时,反应12h后低聚半乳糖合成量达到最大.

摘要： β-半乳糖苷酶广泛存在于动物、植物和微生物中.它能水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖,有的β-半乳糖苷酶还具有转糖苷能力,以乳糖为底物合成低聚半乳糖.从土壤中筛选得到一株产β-半乳糖苷酶较优菌株,鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)L709.对该菌株进行产酶条件优化,通过单因素试验,确定最佳产酶培养基组成为(g/L):乳清粉20,蛋白胨10,酵母提取物5,NaC15,MgSO4·7H2O0.5,KH2PO40.75.最佳产酶培养条件为:30°C培养60h.经优化后酶活达到11.49U/mL,与优化前比较提高了2.5倍.通过对其水解与转糖苷进程的研究,发现当底物浓度为20％时,反应12h后低聚半乳糖合成量达到最大.

摘要： 本发明公开了一种产转糖基活性β‑半乳糖苷酶的菌株，其特征在于：其分类命名为开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefiri)L6，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 20191030，保藏日期为2019年12月9日。

摘要： 本发明提供一株耐有机溶剂高效转糖基β‑半乳糖苷酶高产菌株，β‑半乳糖苷酶，其编码核酸，包含该核酸的表达载体以及含有该核酸或表达载体的转化体。本发明还提供所述耐有机溶剂β‑半乳糖苷酶作为催化剂，以廉价易得的乳糖为供体，在非水相体系中修饰核苷类药物的应用。该酶优良的催化活性很好地克服了目前核苷糖基化反应中糖基供体价格昂贵等问题，具有潜在的工业应用价值。

摘要： 本发明公开一种耐有机溶剂半乳糖苷酶高产菌株，一种半乳糖苷酶以及一种以乳糖为供体酶法半乳糖基化核苷类化合物的方法。该菌株分类命名为

摘要： 本发明公开了一种产生低温β-半乳糖苷酶的短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)和利用此菌株生产低温β-半乳糖苷酶的生产工艺，同时还提供了低温β-半乳糖苷酶。通过利用短芽孢杆菌(CGMCC.No.1424)，建立菌种保藏、复壮及选育的系统工艺技术，经过培养基配方优化筛选及发酵工艺条件优化控制，使发酵周期缩短，确立了稳定的发酵工艺，生产的低温β-半乳糖苷酶具有良好的低温活性、高酶活。可广泛用于发酵乳、饮料、冰激凌糖等食品医药、环境检测等各个领域，有效改善乳制品的风味和营养，解除乳糖不耐受患者因食用乳制品引起的腹泻、腹涨等多种不良反应，能最大限度地保留其营养及风味物质方面具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种产生β-半乳糖苷酶的乳球菌(Lacfococcussp.)和利用此菌株生产β-半乳糖苷酶的生产工艺，本发明还同时提供了β-半乳糖苷酶。本发明利用乳球菌(CGMCC.No.1425)，建立菌种保藏、复壮及选育的工艺技术，通过培养基配方优化筛选及发酵工艺条件优化控制，使发酵周期缩短，确立了稳定的发酵工艺，本发明的β-半乳糖苷酶具有良好的高温活性、高酶活。其产品广泛用于发酵乳、饮料、冰激凌糖等食品医药、环境检测等各个领域，解除乳糖不耐受患者因食用乳制品引起的腹泻、腹涨等多种不良反应，能最大限度地保留其营养及风味物质方面具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种产转糖基活性β‑半乳糖苷酶的菌株，其特征在于：其分类命名为开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefiri)L6，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 20191030，保藏日期为2019年12月9日。

摘要： 本发明公开一种耐有机溶剂半乳糖苷酶高产菌株，一种半乳糖苷酶以及一种以乳糖为供体酶法半乳糖基化核苷类化合物的方法。该菌株分类命名为Lactobacillus casei YZ09，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2014540。本发明分离克隆到该菌株所产耐有机溶剂半乳糖苷酶的基因，它具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。菌株YZ09所产半乳糖苷酶具有溶剂耐受性好、作用pH范围广、底物特异性好等性质。该半乳糖苷酶能廉价易得的乳糖为供体在非水相体系中修饰核苷类药物，具有很好的工业应用价值。

摘要： 本发明提供一株耐有机溶剂高效转糖基β-半乳糖苷酶高产菌株，β-半乳糖苷酶，其编码核酸，包含该核酸的表达载体以及含有该核酸或表达载体的转化体。本发明还提供所述耐有机溶剂β-半乳糖苷酶作为催化剂，以廉价易得的乳糖为供体，在非水相体系中修饰核苷类药物的应用。该酶优良的催化活性很好地克服了目前核苷糖基化反应中糖基供体价格昂贵等问题，具有潜在的工业应用价值。

摘要： 本发明公开了一种产生低温β－半乳糖苷酶的短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)和利用此菌株生产低温β－半乳糖苷酶的生产工艺，同时还提供了低温β－半乳糖苷酶。通过利用短芽孢杆菌(CGMCC.No.1424)，建立菌种保藏、复壮及选育的系统工艺技术，经过培养基配方优化筛选及发酵工艺条件优化控制，使发酵周期缩短，确立了稳定的发酵工艺，生产的低温β－半乳糖苷酶具有良好的低温活性、高酶活。可广泛用于发酵乳、饮料、冰激凌糖等食品医药、环境检测等各个领域，有效改善乳制品的风味和营养，解除乳糖不耐受患者因食用乳制品引起的腹泻、腹胀等多种不良反应，能最大限度地保留其营养及风味物质方面具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种产生β－半乳糖苷酶的乳球菌(Lacfococcus sp.)和利用此菌株生产β－半乳糖苷酶的生产工艺，本发明还同时提供了β－半乳糖苷酶。本发明利用乳球菌(CGMCC.No.1425)，建立菌种保藏、复壮及选育的工艺技术，通过培养基配方优化筛选及发酵工艺条件优化控制，使发酵周期缩短，确立了稳定的发酵工艺，本发明的β－半乳糖苷酶具有良好的高温活性、高酶活。其产品广泛用于发酵乳、饮料、冰激凌糖等食品医药、环境检测等各个领域，解除乳糖不耐受患者因食用乳制品引起的腹泻、腹胀等多种不良反应，能最大限度地保留其营养及风味物质方面具有重要意义。