重组人Cu,Zn-SOD包含体的复性、纯化及复性蛋白稳定性研究

摘要

目的 通过体外复性和纯化技术获得具有高纯度、高生物活性的重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCu,Zn-SOD),并研究复性蛋白的稳定性.方法 以透析法对在大肠杆菌中以包含体形式表达的rhCu,Zn-SOD进行复性,采用金属螯合亲和层析对复性样品进行纯化,通过酶活性测定考查复性和纯化的rhCu,Zn-SOD的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性.结果 建立了体外透析复性的基本条件,其比活可达2 380 U·mg-1.该复性样品经金属螯合亲和层析纯化后,结果得到纯度大于95%、比活5 000 U·mg-1、活性回收率大于100%的目的蛋白.复性和纯化蛋白在温度25～70 ℃和pH 5.0～10.5内活性稳定,并可耐受2～10 mol·L-1的尿素和2%～8%的十二烷基硫酸钠(SDS),对更强烈的变性剂盐酸胍稳定性较弱.结论 确定了重组人Cu,Zn-SOD包含体的体外复性条件和复性蛋白纯化方法,且复性蛋白表现出很好的稳定性,为重组人Cu,Zn-SOD的生产奠定了良好基础.