以Delta样蛋白3为靶点的抗体偶联药物质量研究

摘要

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物抗Delta样蛋白3 (DLL3)单抗-MPVP-PBD的质控方法。方法本实验利用转基因细胞法,以转染了DLL3的HEK 293T细胞系为靶细胞测定抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性;利用ELISA法测定结合活性;利用CE-SDS和SEC-UPLC测定大小异质性;利用i CIEF分析电荷异质性;分别利用HIC-HPLC和LC-MS对药物抗体偶联比(drug-to-antibody ratio,DAR)进行测定;利用RP-HPLC测定游离小分子药物含量。结果抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性EC50平均值为(4. 02±0. 22) ng·m L^-1,RSD为5. 47%;结合活性EC50平均值为(12. 67±1. 09) ng·m L^-1,RSD为8. 60%;非还原CE-SDS完整Ig G峰面积百分比为(25. 58±0. 15)%、HHL为(36. 56±0. 24)%、轻链为(14. 61±0. 13)%等,RSD均小于2%;还原CE-SDS重链和轻链峰面积之和为(96. 97±0. 31)%,RSD为0. 32%;SEC-UPLC主峰面积为(98. 68±0. 05)%,多聚体(1. 32±0. 05)%,RSD均小于5%;i CIEF主峰面积为(68. 19±0. 68)%,主峰等电点(8. 28±0. 01),RSD均小于2%;LC-MS测定DAR为2. 08(完整相对分子质量水平)和1. 73(轻重链水平);HIC-HPLC测定DAR为(1. 86±0. 03),0-药物为(19. 49±0. 28)%,1-药物为(11. 21±0. 20)%,2-药物为(48. 64±0. 68)%,3-药物为(5. 21±0. 40)%,4-药物为(15. 44±1. 19)%,RSD均小于10%;LC-MS测定了偶联位点占有率;RP-HPLC测定游离小分子药物为(23. 20±0. 82)%,RSD为3. 53%。结论本实验初步建立了抗体偶联药物抗DLL3单抗-MPVP-PBD的质控方法,该质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可作为其常规检测方法,为我国相关抗体偶联药物的质量检测提供了参考依据。