人乙醛脱氢酶2基因在毕赤酵母SMD1168中的表达研究

摘要

目的 得到一株产人乙醛脱氢酶2(acetaldehydedehydrogenase-2,ALDH2)的重组毕赤酵母菌株,优化其发酵条件以满足生产和科研需求.方法 将ALDH2基因整合到质粒pPIC9K,构建重组表达载体pPIC9K-ALDH2,将重组表达质粒pPIC9K-ALDH2经电转化到毕赤酵母SMD1168中,转化子经MD平板筛选后,用G418筛选多拷贝重组子,测序鉴定.通过改变诱导温度、pH、初始OD值、甲醇浓度等诱导条件,对SMD1168(pPIC9K-ALDH2)发酵的条件进行优化.结果 ALDH2 cDNA整合到毕赤酵母基因组中,得到SMD1168(pPIC9K-ALDH2);获得最佳的诱导表达优化条件:在28℃、pH=7.0、诱导初始OD_(600)=12、每隔24h添加1.5%甲醇、转速为300r/min,发酵所产生的人ALDH2酶活可达到0.115 U/ml,相对较高.结论 以蛋白酶缺陷型毕赤酵母SMD1168为宿主,分泌表达质粒pPIC9K为载体,能够成功构建重组子SMD1168(pPIC9K-ALDH2).