烟曲霉Bem46基因荧光定位菌株构建及对极性生长相关基因影响作用初探

摘要

目的 构建以eGFP作为荧光标记的烟曲霉Bem46基因定位菌株,观察其在烟曲霉不同形态中的定位情况,初步明确该基因对极性生长相关基因Bem1、Bud5表达的影响.方法 运用分子生物学方法将烟曲霉Bem46基因克隆入质粒pUCGH,构建荧光定位载体.原生质体法转化烟曲霉获得该基因定位菌株并验证.激光共聚焦显微镜观察绿色荧光在烟曲霉孢子、芽管以及菌丝状态下分布情况.RT-PCR观察对照菌株Ku80和△Bem46中极性生长相关基因Bem1、Bud5的表达量.结果 通过全基因克隆成功获得烟曲霉Bem46基因定位菌株并经PCR验证.激光共聚焦显微镜下绿色荧光在孢子中弥散分布,在孢子即将发芽时荧光在孢子一侧聚集,并随着芽管形成,荧光在极性生长的一侧延伸分布于整个菌丝中,在菌丝形成侧枝膨大处可见荧光明显聚集.RT-PCR结果表明△Bem46中基因Bem1、Bud5表达量均较对照菌株有所下降.结论 烟曲霉Bem46基因可能同孢子发芽、菌丝发生侧枝的极性生长相关;且该基因缺陷可影响极性生长相关基因Bem1、Bud5表达.