日本血吸虫亲环素A和乳酸脱氢酶编码基因的克隆及序列分析

摘要

目的识别和克隆日本血吸虫新基因.方法对本实验室获得的EST进行同源性分析,识别血吸虫新基因;根据EST设计引物,用锚着PCR法从cDNA文库中扩增出新基因全长cDNA,并将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,用生物信息学技术对获得的编码基因进行结构与功能的分析.结果EST同源性分析得到一个完整编码基因,开放阅读框(ORF)495bp,编码164个氨基酸;锚着PCR法获得另一EST的3'端所缺序列,得到完整编码阅读框,其ORF 999bp,编码332个氨基酸.利用生物信息学技术确定它们分别为日本血吸虫亲环素A(CyPA)和乳酸脱氢酶(LDH)的编码基因.重组质粒经双酶切及测序鉴定证明日本血吸虫CyPA和LDH原核表达质粒构建成功.结论克隆到日本血吸虫亲环素A和乳酸脱氢酶编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下了基础.