钩端螺旋体鞭毛蛋白B(FlaB)基因flaB在大肠杆菌内的表达

摘要

目的在大肠杆菌中高效表达钩端螺旋体内鞭毛蛋白(FlaB)用于钩体病的诊断和预防.方法将目的基因flaB定向克隆至原核表达载体pGEX-5T,构建重组融合表达质粒pGF;Western-blot 鉴定其特异性,ELISA法判定其用于钩体病诊断的可行性.结果 GST-FlaB主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的40%;Western-blot结果显示该蛋白与FlaB抗血清能呈现明显的单一条带;包涵体经Triton X-100及尿素纯化后,纯度可达90%,并且能溶于包被缓冲液中;ELISA检测显示纯化后的GST-FlaB具有较好的特异性.结论钩端螺旋体FlaB可以高效表达并可能用于ELISA检测及钩体病的预防.