基于cDNA末端快速扩增的刚地弓形虫核仁G蛋白-1的克隆

摘要

目的克隆弓形虫核仁G蛋白-1(NOG1)基因的全长cDNA序列.方法根据NCBI GeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5'-末端快速扩增法(5'-RACE)和cDNA 3'-末端快速扩增法(3'-RACE)分别对已知序列进行延伸,将扩增获得的3'-端和5'-端未知序列与位于中间位置的已知序列进行拼接,然后经Blast检验全长序列的正确性.结果 5'-RACE扩增获得3个不同长度的片断,最长片断全长1287 bp,去除引物和夹杂的已知序列后,通过5'-RACE在5'端扩增获得未知序列为1 196 bp.3'-RACE扩增后得到一条特异性条带,位于大约1.7kb左右,测序全长为1 634 bp,去除引物和已知序列,经3'-RACE扩增获得的3'-端未知序列为1 204 bp.Blast全长为3 167 bp的3段拼接序列,发现其覆盖NOG1基因cDNA的完整ORF或者CDS序列(650 bp-2 809 bp).推导翻译出的蛋白质一级结构包含719个氨基酸(aa),在所有已发现物种的NOG1中,弓形虫NOG1基因的cDNA和相应的aa序列都是最长的.该序列已登录NCBI GeneBank,核酸序列登录号AY686734,对应蛋白质的aa序列登录号为AAT94290.结论本研究首次克隆获得了弓形虫NOG1基因的全长cDNA序列,并对相应的aa序列进行了推导翻译和简单分析.