幽门螺杆菌脂蛋白基因的克隆和生物信息学分析

摘要

目的 完成幽门螺杆菌(Hp)郑州分离株MEL-HP27脂蛋白(1ipoprotein)基因lpp20的克隆和测序;分析该基因序列的变异性和表达蛋白的化学及免疫学特征,为Hp疫苗抗原的筛选奠定基础.方法 用PCR方法从MEL-HP27的染色体DNA中扩增lpp20基因片段,将其与载体pNEB193连接后,用于转化大肠杆菌JM109,通过酶切和测序鉴定重组质粒.应用生物信息学软件Omiga 2.0、GeneDoc 2.3和GenBank、Swiss-port数据库对7个Hp菌株(MEL-HP27、60190、Chongqing、CH-CTX1、J99、17874、26695)的lpp20基因序列进行同源性比较,并对该基因编码蛋白的主要化学特征和抗原结构域进行分析.结果 Hp lpp20基因的核苷酸序列长度为528 bp,不同菌株间的同源性为96.0%～98.1%.lpp20基因编码的氨基酸序列长度为175 aa,不同菌株间的同源性为98.3%～100%.MEL-HP27 lpp20表达蛋白的分子量为19.122 kDa,等电点为9.950,具有2个抗原性结构域.结论 Hp lpp20基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列均具有较高的保守性,但保守性低于100%,采用该基因表达蛋白作为疫苗和诊断抗原时,有必要考虑人群感染的优势菌株的遗传特征,以提高免疫保护的覆盖率和免疫诊断的敏感性.Hp lpp20基因编码的蛋白具有典型抗原分子的结构特征,有望成为Hp疫苗候选抗原.