尿路致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛fimH和fimC基因原核表达质粒的构建及表达

摘要

目的 构建以尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛编码基因fimH 和fimC为目的基因的原核重组表达质粒,诱导其在E.coli BL-21中表达,并对其免疫原性进行分析.方法 PCR法自UPEC标准菌株J96获取 fimH和fimC 基因,分别插入原核表达载体pGEX-4T-2;将重组表达质粒转染感受态E.coli BL-21,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE 和Western blot鉴定并纯化目的蛋白fimH和fimC蛋白,定量后免疫BALB/c小鼠,动态检测抗体产生水平.结果 PCR法克隆出全长为903bp的fimH和720bp的fimC基因,构建的原核表达质粒pGEX-4T-2-fimH及pGEX-4T-2-fimC经诱导可分别表达出60KD和48KD左右的GST融合蛋白;蛋白经纯化后免疫动物能诱导产生高效价的IgG抗体.结论 成功获取了UPECⅠ型菌毛基因fimH和fimC,所构建的原核表达质粒在BL-21中成功表达;fimH有免疫原性.