肠出血性大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

目的 建立能够分泌针对肠出血性大肠杆菌O157:H7表面抗原的特异性单克隆抗体,以期用于该病原菌的检测.方法 以敲除毒力基因的O157突变株F25全菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,分别以全菌抗原和热酚水法纯化的O157 LPS抗原用间接ELISA筛选能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定.结果 建立了稳定分泌抗O157 LPS抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6,分泌抗体属IgG3亚类,轻链为κ型.腹水抗体ELISA效价达1:3.2×106.以辛酸/饱和硫酸铵法纯化后抗体效价为1:1.6×106,亲和常数Ka大于6.14×10-11mol/L.用于协同凝集和间接荧光抗体试验具有良好的特异性.结论 该单克隆抗体针对O157的LPS抗原,特异性强,亲和力高,可用于O157的检测或分离鉴定.