适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

摘要

目的 制备抗HIV-1 p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1 p24抗原检测试剂.方法 以基因工程原核重组抗原HIV-1 p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1 p24抗原检测试剂.结果 成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1 p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合"16G12+2F2b-HRP",该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20 pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性.结论 本研究初步成功地建立了HIV-1 p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础.