3种结核分枝杆菌复活促进因子基因的克隆、原核表达与纯化鉴定

摘要

目的 构建结核分枝杆菌复活促进因子B(rpfB)、D(rpfD)、E(rpfE)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化.方法 采用聚合酶链反应(PCR)以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板扩增出rpfB(1 089bp),rpfD(465bp)和rpfE片段(519bp),并连接在pET32a(+)载体上,重组质粒用酶切和DNA测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达了rpfB,rpfD和rpfE 3种蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白.结果 双酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现分别在61kDa、39kDa、41kDa处有特异性蛋白条带.结论 成功构建了3种重组表达质粒pET32a(+)-rpfBv、pET32a(+)-rpfDv、pET32a(+)-rpfEv,并获得了3种高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.