乳酸乳球菌食品级分泌性表达载体pSQZ的构建及报告蛋白的表达

摘要

目的 构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L lactis)食品级分泌表达载体,表达报告蛋白核酸内切酶(NucA).方法 PCR扩增乳酸乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)编码基因的启动子、核糖体结合位点、分泌信号和成熟肽前11个氨基酸编码序列,克隆到载体pSH91中,构建食品级分泌性表达载体pSQZ;克隆报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的编码序列nucA到pSQZ中分泌信号后,转化乳酸乳球菌MBP71,构建乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA;采用TB-D法和酶谱法检测乳酸乳球菌分泌性表达的NucA活性.结果 PCR扩增得到usp45基因片段,酶切、连接到载体pSH91中构建了食品级表达载体pSQZ;将扩增的nucA基因片段克隆入载体pSQZ并转化乳酸乳球菌,得到乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA.在TB-D平板上,L lactis MBP71/pSQZ- nucA克隆子周围出现橙色光晕;在酶谱检测中,L lactis MBP71/pSQZ-nucA上清和菌体在18 kDa位置均有橙色条带,但上清条带亮度和宽度大于菌体.结论 成功构建了乳酸乳球菌食品级分泌表达系统,实现了报告蛋白NucA在乳酸乳球菌中分泌性表达,为进一步保护性抗原的分泌性表达研究奠定了基础.