隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统的构建及鉴定

摘要

目的 获取隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30基因,并构建原核表达系统,获得相应的重组蛋白.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增出p30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并进行生物信息学分析及预测.再将亚克隆与表达载体PET-28 a (+)分别酶切并连接,经IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA亲和层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting检测表达效果.结果 PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%～100%和99%～100%,理论等电点和分子量分别为6.4854和31 842Da,并存在9个潜在的抗原表位.经酶切、测序结果表明质粒已导入Rosetta.SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达融合蛋白.结论 成功构建微小隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统.