罗丹明B单克隆抗体的制备及初步鉴定

摘要

采用N-羟基琥珀酰亚胺活性脂(NHS)法将罗丹明B(Rhodamine B,RB)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联形成免疫原和检测原,经紫外分光光度计扫描鉴定初步判断偶联成功.以人工合成免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了3株稳定分泌针对RB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2D1、4C3和7F11,将7F11注入BALB/c小鼠腹腔产生腹水,用所得到的腹水建立了间接竞争ELISA (icELISA)标准曲线.对icELISA的工作条件进行了优化,方阵试验确定了包被抗原的工作浓度为1∶2000,腹水抗体的工作浓度为1∶64000.利用RB作药物抑制标准曲线,其线性方程为y=0.2848x-0.2847(R2=0.9924),线性范围为1～1 000 ng/mL,最低检测浓度为1 ng/mL.交叉试验表明,该单抗与RB的抑制率为100％,与罗丹明6G、罗丹明123、苯酚红、副品红、中性红、曙红Y、橙黄Ⅱ、甲基橙、结晶紫均无交叉反应.