犬细小病毒基因疫苗单克隆抗体的制备

摘要

为获得可用于犬细小病毒(CPV)感染的治疗和快速诊断的单克隆抗体,从病料中分离了l株犬细小病毒,经PCR扩增VPl全基因并进行序列分析,确定为CPV-2 a型.再将VP1基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构建了基因疫苗pcDNA3-VP1.用该基因疫苗免疫BALB/c小鼠3次后,取抗体效价高的两只小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,经间接ELISA检测,结果获得了3株杂交瘤细胞株,该3株单抗与犬、猫细小病毒能发生反应,均不与犬瘟热病毒、流感病毒和犬腺病毒发生反应,诱生的腹水可体外中和犬细小病毒,其中两株单抗的中和效价为1∶256,l株单抗腹水的中和效价低于1∶128.结果表明,该CPV VP1基因疫苗可制备具有一定中和效价的CPV单克隆抗体.