猪伪狂犬病病毒ZY-2014株的分离与鉴定

摘要

从河南省某规模化猪场的死亡仔猪中分离到1株疑似猪伪狂犬病病毒,命名为ZY-2014株,并对其进行了PCR鉴定、gE基因序列分析、动物感染试验等鉴定.病毒经vero细胞培养可产生典型细胞病变,用Reed-Muench法测定病毒的滴度为107.4TCID50/100 μL.分离病毒基因组DNA经过gD、gE、gG、三对特异性检测引物扩增后,均出现伪狂犬病毒特异性目的条带,分别为217 bp、636 bp、1440 bp.测序结果与预期结果相符.将ZY-2014毒株gE基因测序结果与10个新分离毒株、14个经典毒株进行同源性比对分析,其核苷酸及推导的氨基酸序列与国内2012年以来新分离毒株的同源性分别为99.6％ ～ 100％和99.1％ ～ 100％,与2012年以前分离毒株核苷酸及推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7％ ～ 99.6％和95.7％ ～99.3％.遗传进化树结果显示,所分离的ZY-2014毒株与2012年以来新分离毒株同属一分支,与经典毒株分属不同进化分支.动物攻毒试验中,家兔和小鼠均出现明显的伪狂犬病临床症状.鉴定试验表明,分离株ZY-2014是一株猪伪狂犬变异毒株.