膀胱癌BIU-87细胞株导向肽NYZL1靶向性的实验研究

摘要

目的验证导向肽NYZL1与膀胱癌BIU-87细胞株及其移植瘤结合的靶向特异性。方法2014年4—12月固相合成导向肽NYZL1及阴性对照肽svNYZL1,采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）标记,制备实验组荧光分子探针FITC-氨基己酸-CSSPIGRHC（FITCNYZL1）和对照组荧光分子探针FITC-氨基己酸-CRIGSPHSC（FITC-svNYZL1）。向膀胱癌BIU-87细胞株悬液中分别加入两种探针孵育,用流式细胞仪检测细胞平均荧光强度值,明确探针的亲和作用。将膀胱癌BIU-87细胞株爬片,分别加入两种探针孵育,用激光共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope,LSCM）观察探针与细胞结合的荧光图像,明确其亲和作用的特异性。选取16只SPF级BALB/c-nu雄性裸鼠。3~4周龄。体质量15~18 g。成功构建膀胱癌BIU-87细胞荷瘤裸鼠模型。采用完全随机分组法分为2组,每组8只,经尾静脉分别注入两种探针。4 h后,实验组和对照组各取5只,剖取肿瘤组织、心、肝、脾、肺、肾、膀胱和胆囊,光学分子成像系统观察肿瘤及各组织的荧光图像;24 h后,实验组和对照组各取3只荷瘤裸鼠,剖取肿瘤组织、心、肝、脾、肺、肾和膀胱,制作冷冻切片,LSCM下观察肿瘤及各组织的荧光图像。结果流式细胞仪检查实验组和对照组的平均荧光强度值分别为50.34±3.63和17.72±1.57,差异有统计学意义（P＜0.05）。LSCM观察实验组细胞可见明显的绿色荧光,对照组细胞未见明显的绿色荧光。体内研究发现,光学分子成像系统观察肿瘤组织、胆囊及膀胱可见明显荧光,其余器官如心、肝、脾、肺和肾等未见明显荧光。LSCM观察下实验组的肿瘤组织中可见明显绿色荧光,而实验组其他器官（心、肝、脾、肺、肾和膀胱）和对照组肿瘤组织及器官中未见绿色荧光。结论膀胱肿瘤导向肽NYZL1能够与膀胱癌BIU-87细胞株及其移植瘤靶向性结合,并可携带荧光素标记肿瘤组织。