结核分枝杆菌持留状态体内外模型的建立与检测

摘要

目的 建立体内外结核分枝杆菌持留状态模型,检测在不同条件和化疗阶段中结核分枝杆菌持留菌,探讨其与化学治疗的关系.方法 应用低氧培养、定量逆转录聚合酶链反应测定结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(ICL)、小分子热休克蛋白(Acr)及85B蛋白的mRNA表达变化的方法检测体内外模型中结核分枝杆菌持留菌.结果 体外及动物模型中均存在结核分枝杆菌低氧培养阳性,体外模型中结核分枝杆菌ICL mRNA和Acr蛋白mRNA在低氧条件下表达逐渐增加,4 d时显著增加,其对数值分别为(5.3±0.9)和(6.4±1.6)拷贝/ml,而85B mRNA在有氧条件下明显增加,10 d时的对数值为(6.1±0.9)拷贝/ml,在低氧条件下无明显变化.在小鼠感染与治疗模型中,ICL mRNA在感染的2周和4周均有表达,在治疗4周后下降;Acr mRNA在感染4周及治疗4周不表达或表达很少,治疗8和10周表达量增加,10周的对数值为(6.2±1.7)拷贝/ml,治疗12周直至停药后4周仍有表达,停药4周的对数值为(3.0±1.6)拷贝/ml;而85B蛋白mRNA则在治疗前高表达,对数值为(6.4±1.1)拷贝/ml,随着治疗时间延长而逐渐降低,治疗12周时测定值为阴性.结论 成功建立了结核分枝杆菌持留状态的体外及动物模型,ICL mRNA、Acr蛋白mRNA高表达可作为持留菌存在的哪标志,应用液体低氧培养并联合mRNA检测有可能检测到结核分枝杆菌持留菌.