柱花草单粒种子DNA提取和RAPD扩增

摘要

以7个柱花草品种的单粒种子为材料,采用改良的CTAB法提取DNA,进行RAPD扩增.结果表明,采用单粒种子提取的DNA完整性好.采用模板3μL,随机引物2μL(10μmol/L),dNTPs 2.5μL(2.mmol/L),Taq酶0.2μL(5 U/μL),MgCl2溶液2μL(25mmol/L),10×Buffer2.5μL(500 mmol/L KCl,100mmo1/L Tris-C1,pH 9.0,25℃,10 mL/L Triton X-100),无菌水12.8μL,总体积为25μL的反应体系,可扩增出谱带清晰的RAPD产物.扩增程序为:94℃预变性4 min;94℃变性30 s、37℃复性30 s、72℃延伸90 s,共40个循环;72℃延伸6 min.