水稻单粒种子DNA提取及RAPD程序的优化研究结果

摘要

浙江大学农业与生物技术学院彭锁堂等4位先生，用水稻单粒干种子作材料，进行DNA提取方法和RAPD程序优化研究，结果表明，用CTAB法微量提取水稻干种子DNA，可获得理想的扩增结果，其最佳的反应体系和条件是随机引物浓度100～400μg／L、Mg^2＋浓度2～4mmol／L、dNTPs浓度100～400μmol／L、Taq酶IU。变性94 30S，退火38℃ 30S，延伸72℃ 1min，40个循环；若要节省时间和成本，可不进行预变性处理，其反应体积可降至12．5μl，扩增效果仍与前者一样。这是由于RAPD技术在广泛应用中稳定性差、重复性不好、伪阳性多，而PCR在反应中变性、退火、延伸温度、费时，反应过程有循环数，反应体系中有多种试剂来源，