慢病毒介导睫状神经营养因子基因修饰嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤

摘要

cqvip:背景:以往研究证实,睫状神经营养因子与嗅鞘细胞单独应用均对脊髓损伤具有一定的治疗作用,但两者联合应用是否有更好的治疗效果尚未见报道。目的:慢病毒介导睫状神经营养因子基因修饰嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的作用及其相关机制。方法:①体外实验:实验分为4组,对照组进行脊髓神经元细胞单独培养,模型组进行脊髓神经元细胞单独培养,正常嗅鞘细胞共培养组采用Transwell小室进行脊髓神经元细胞与正常嗅鞘细胞共培养,过表达嗅鞘细胞共培养组采用Transwell小室进行脊髓神经元细胞与睫状神经营养因子过表达嗅鞘细胞共培养,后3组给予海仁藻酸建立神经元细胞损伤模型。共培养12 h后,采用CCK8法检测细胞活力,qRT-PCR与Western blot检测脊髓神经元细胞中BAX、BCL-2、Caspase3、CNTF的表达;②体内实验:实验分为4组,假手术组、模型组、治疗组、联合治疗组,后3组采用改良Allen’s重物打击法制作脊髓损伤大鼠模型,造模1周后,治疗组、联合治疗组分别在损伤区上、下1 mm处各注射5μL嗅鞘细胞悬液或睫状神经营养因子过表达嗅鞘细胞悬液,假手术组与模型组大鼠依照同样的方法注射等量培养基;③治疗后4周,采用BBB评分与爬网格实验评估大鼠运动能力、苏木精-伊红染色检测脊髓损伤的病理进展、qRT-PCR与Western blot检测脊髓组织中BAX、BCL-2、Caspase3、CNTF的表达。结果与结论:①睫状神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞能显著抑制细胞损伤以及脊髓损伤(P<0.001);显著提高睫状神经营养因子的表达水平(P <0.01)以及显著降低凋亡相关分子BAX、BCL-2、Caspase3的表达水平(P <0.01);②睫状神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞移植能够改善脊髓损伤引起的运动功能下降,其机制可能与下调BAX、BCL-2、Caspase3表达,降低脊髓神经元细胞凋亡相关。