骨髓间充质干细胞与胰岛细胞共培养对胰岛功能的影响

摘要

背景:骨髓间充质干细胞能分泌多种生长因子并支持造血,但能否保护和修复胰岛细胞功能尚不明确。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞与其胰岛细胞共培养对胰岛功能的影响。方法:从八九周龄的雄性SD大鼠中提取股骨骨髓,采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合提取骨髓间充质干细胞;另取八九周龄的雄性SD大鼠,从胆总管插管注入1 g/L胶原酶P 10 mL,剪下胰腺,采用Histopaque不连续密度梯度离心法分离与纯化胰岛细胞,在显微镜下用1 mL的pipet移液器手工挑取筛选薄膜完整的胰岛细胞。将第3代骨髓间充质干细胞与胰岛细胞进行共培养,共分为4组:对照组(单纯大鼠胰岛细胞培养)、直接共培养组(接种有骨髓间充质干细胞的培养板内加入胰岛细胞进行共培养)、间接共培养组1(利用transwell培养皿进行间接共培养)、间接共培养组2(利用骨髓间充质干细胞培养液培养胰岛细胞)。培养过程中观察胰岛形态及生长状况,在培养后第3,7,14天用ELISA法检测胰岛素分泌量。实验方案经延边大学附属医院医学伦理委员会批准。结果与结论:(1)4组之间采用方差分析,骨髓间充质干细胞与胰岛细胞共培养能明显提高胰岛素的分泌量,而且共培养第7天胰岛素分泌量达高峰;(2)在培养后第7天时,间接共培养组1的胰岛素分泌量明显高于直接共培养组,差异有显著性意义(P<0.05);(3)结果表明,骨髓间充质干细胞与胰岛细胞利用transwell培养皿进行间接共培养可以明显提高胰岛素的分泌量,而且共培养7 d效果较好。