胰蛋白酶预消化后植块法分离培养人胚成骨细胞

摘要

目的:改良成骨细胞分离培养方法,为骨形成、骨代谢以及骨组织工程等基础研究提供种子细胞.方法:实验于2002-09/2005-09在陕西省干细胞工程技术研究中心完成.①无菌条件下取五六个月龄流产胎儿颅盖骨(家属知情同意),去除骨膜及周围结缔组织,然后用2.5g/L胰蛋白酶消化20 min,终止消化后,去除骨缝组织,剪碎,将碎骨块接种于培养瓶中分离培养成骨细胞.②细胞纯化采用差速贴壁法.通过相差显微镜观察人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征.③用碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色等方法对所获得的成骨细胞进行鉴定.结果:①人胚成骨细胞原代和传代培养的生长特征:原代培养至第5天,骨块边缘出现零散的细胞,这些细胞的形态主要为梭形、三角形或多边形.原代培养第14天后,形成融合层,细胞呈圆形、卵圆形或方形紧密排列,叠层生长.传代细胞主要呈三角形或方形细胞,细胞排列无方向性,出现集落样生长趋势.②人胚成骨细胞的鉴定结果:90%以上分离获得细胞碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈阳性.结论:采用酶消化后植块的改良植块培养法可在较短时间内获得大量成骨细胞,这些细胞具有典型的成骨细胞形态和功能,是一种较好的分离培养人胚成骨细胞的方法.