蛋白胶联剂京尼平与戊二醛的生物学特性比较

摘要

目的:从交联度、细胞毒性、溶胀率与降解率方面比较京尼平和戊二醛交联明胶的生物学特性.方法:实验于2005-06/2006-01在哈尔滨医科大学附属第二医院实验中心完成.①材料分为两组,京尼平组用10g/L京尼平交联明胶72 h,戊二醛组用10 g/L戊二醛交联明胶24 h.②检测交联度:每组材料取8个样本,其中5个加入碳酸氢钠和三硝基苯磺酸,再加盐酸,在346 nm测吸光度值(A三硝基苯磺酸).另取3个样本先加盐酸,然后再加三硝基苯磺酸,其余步骤相同,测得吸光度取平均值作为对照(A对),交联后吸光度值为:A交联后=A三硝基苯磺酸-A 对.再取11mg明胶加19 μL水,不加京尼平,同样步骤测吸光度,得到交联前吸光度(A交联前).交联度=(A交联前-A交联后)/A 交联前×100%.③细胞毒性试验:按照1 cm2/mL比例用培养液浸提5组材料制备浸提液,将中国仓鼠V-79细胞种植于96孔板,分为3组:阴性组(单纯培养液)、京尼平组(加京尼平明胶浸提液)、戊二醛组(加戊二醛明胶浸提液),48 h后做四甲基氮唑蓝检测.细胞相对增殖率=浸提液组平均A值/阴性对照组平均A值×100%.各组的细胞相对增殖率转换成6级(0～5级)细胞毒性以评定材料的毒性程度.④溶胀度与降解率:材料交联完成后立即称重(W0).然后在离心管中加2 mL无菌磷酸盐缓冲液,24 h后两组各取8个材料,用无菌滤纸擦干水分后称重(W1).溶胀率=(Wi-W0)/Wo×100%.其他材料3d换液1次,于1,2,3,4,8,12周分别取出两组材料各8个,用无菌滤纸擦干水分后称重(W2).降解率=(W1-W2)/W 1×100%.结果:①京尼平和戊二醛交联明胶材料的交联度分别为79.1%和52.3%.②京尼平材料的溶胀度高于戊二醛材料[(166±38)%,(133±31)%,P＜0.05].③京尼平和戊二醛材料在磷酸盐缓冲液中浸泡12周,降解率差异无显著性(14.1%,12.6%).④戊二醛交联明胶的浸提液培养的细胞出现坏死现象,而京尼平材料浸提液培养的细胞生长良好.京尼平和戊二醛材料的细胞增殖度分别为96.6和23.1.结论:京尼平交联明胶材料与戊二醛交联明胶材料比较,交联度降低,溶胀度增加,但二者制成的材料在磷酸盐缓冲液中浸泡12周都仅有少量降解,差异无显著性.京尼平的细胞毒性明显低于戊二醛.