人α防御素3前体蛋白对克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌作用

摘要

目的:分析α防御素3前体蛋白对于克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌效果,为进一步研究人类α防御素3的杀菌机制提供依据。方法:实验于2005-11/2006-09在上海交通大学生命科学技术学院刘建华实验室完成。将α防御素3前体的编码基因克隆到载体pDEST17中,载体转化入大肠杆菌DE3细胞,通过体外诱导及亲和纯化的方法获得α防御素3前体蛋白。根据在不同蛋白浓度下生存下来大肠杆菌和克雷伯菌所占的比例以及导致50%,90%和99%细菌死亡(LD50,LD90和LD99)时人α防御素3前体蛋白浓度来判断前体蛋白的杀菌作用。结果:①在1L培养基培养条件下,可获得纯化后α防御素3前体蛋白12mg,复性效率为15%～20%。②蛋白浓度为5,10,15和30mg/L时,克雷伯菌存活率分别为50%,33%,10%和4%。蛋白浓度为10,20,30和45mg/L时,大肠杆菌存活率分别为50%,10%,5%和1%。③克雷伯菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为5和35mg/L。大肠杆菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为10mg/L和45mg/L。结论:重组纯化的人α防御素3前体蛋白具有有效杀灭大肠杆菌和克雷伯菌的作用。