多种细胞因子诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

摘要

背景：肝细胞移植是治疗终末期肝功能衰竭的有效方法之一，却面临细胞来源缺乏、体外难以大量增殖、传代后无法保持其原有特性、免疫排斥等因素的限制，寻找新的肝细胞来源尤为迫切。目的：探讨肝细胞生长因子、酸性成纤维细胞生长因子及抑瘤素M诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞的能力。设计、时间及地点：细胞对照观察，于2006—06／2007—03在泸州医学院附属医院实验室完成。材料：清洁级雄性Wistar大鼠24只用于制备骨髓间充质干细胞。红细胞裂解液由泸州医学院附属医院传染免疫实验室配制。重组鼠肝细胞生长因子、抑瘤素M为美国R＆D产品，酸性成纤维细胞生长因子由美国Peprotech生产。方法：采用红细胞裂解＋贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，胰蛋白酶消化后传代。传至第4代，以5×10^7L^-1接种，设立6组向肝细胞诱导分化：第1组作为对照，不加任何细胞因子；第2组加入肝细胞生长因子、酸性成纤维细胞生长因子；第3组加入肝细胞生长因子、抑瘤素M；第4组加入酸性成纤维细胞生长因子、抑瘤素M；第5组加入肝细胞生长因子、酸性成纤维细胞生长因子、抑瘤素M；第6组于1～9d加入肝细胞生长因子，9-18d加入酸性成纤维细胞生长因子，9-21d加入抑瘤素M。每组所加入的各种细胞因子终末浓度均为20μg／L。主要观察指标：采用溴甲酚绿法、化学发光法、RT-PCR法检测肝细胞特异性标志物白蛋白、甲胎蛋白的表达。采用谷氨酸脱氢酶法检测尿素含量。结果：诱导0，7，14，21d，未加入诱导因子的对照组及酸性成纤维细胞生长因子＋抑瘤素M组无白蛋白、尿素表达，肝细胞生长因子＋酸性成纤维细胞生长因子＋抑瘤素M组培养基上清液中甲胎蛋白、白蛋臼、尿素含量均显著高于其余因子组（P〈0．05）。结论：酸性成纤维细胞生长因子与抑瘤素M共同作用无法诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化，二者联合肝细胞生长因子可成功诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞。分时段加入此三种细胞因子，可能影响了细胞因子间的相互作用而导致分化率降低。