三种细胞因子组合诱导小鼠骨髓间充质干细胞跨越分化肝细胞的研究

摘要

成体干细胞的可塑性是目前细胞生物学的热点话题，特定的组织干/祖细胞具有多项分化潜能，不仅可以分化为同一胚层来源的细胞，而且可以跨胚层“横向分化”(Trans-differentiation)为不同胚层来源的细胞。但对干细胞的研究还是体内实验为主，没有成熟的体外分离培养肝干细胞的方法。骨髓间充质干细胞具有自我更新和多向分化潜能的特性。一些研究表明经适当处理或是在合适微环境下，骨髓来源的细胞可以在体外mRNA水平上表达多种肝脏特异性基因，表明骨髓可以作为一种肝细胞的祖细胞来源。本文为探讨体外成年小鼠骨髓间充质干细胞(BM MSCs)是否可通过三种细胞因子组合诱导定向分化为肝细胞，我们从小鼠骨髓中获得间充质干细胞，用添加20ng/ml HGF、10ng/ml FGF-4、10ng/ml OSM和10％NBS的IMDM培养液诱导这些细胞向肝细胞分化。诱导组细胞出现肝细胞样形态变化；培养第10天出现AFP基因表达，其中AFP第20天表达减弱；第15天开始出现AL3、CK18基因表达，而后持续到20天；第20天出现TAT表达。免疫荧光反应表明，培养20天时ALB、CK18表达为阳性；诱导20天的细胞PAS糖元合成反应呈阳性。从而，骨髓间充质干细胞可在HGF,FGF-4和OSM三种细胞因子组合诱导下跨越分化为肝细胞。该体系的建立可能有助于研究间充质干细胞跨越分化的机制，也为肝脏疾病的治疗提供细胞来源。

目录

第一部分文献综述 细胞因子体外诱导骨髓干细胞分化为肝细胞的研究进展

一、前言

二、成体干细胞和胚胎干细胞向肝脏细胞分化技术的比较

三、多种细胞因子在肝细胞分化过程中的应用

四、参考文献

第二部分实验研究

一、前言

二、材料与方法

(一)实验材料

(二)实验方法

三、实验结果

(一)肝细胞分化过程中细胞形态的观察

(二)肝细胞分化过程中特异性基因的表达

(三)分化过程中肝细胞特异性蛋白的免疫荧光法检测

(四)分化细胞PAS糖元合成的检测

(五)附图

四、结果讨论

五、研究结论

六、参考文献

七、附录

致谢