不同剂量骨保护素对破骨细胞内一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶的影响

摘要

背景：骨保护素和一氧化氮在防治骨质疏松方面有重要作用，但目前关于两者在抑制破骨细胞增殖分化方面的关系研究较少。 目的：验证不同剂量的骨保护素对破骨细胞内生成一氧化氮量及内皮型一氧化氮合酶活性的影响。 方法：用抗酒石酸酸性磷酸酶染色验证诱导生成的破骨细胞；将诱导生成的破骨细胞分成6个组，空白对照组不加任何试剂；阴性对照组培养液中加入培养液；骨保护素组分为4组分别加入10，25，50，75μg/L不同剂量的骨保护素试剂。采用Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒，利用流式细胞仪测定破骨细胞凋亡率；荧光定量PCR检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA及蛋白激酶K mRNA 的表达量变化；一氧化氮检测试剂盒检测破骨细胞中内一氧化氮浓度；内皮型一氧化氮合成酶活力试剂盒检测破骨细胞内一氧化氮合酶的活力；骨保护素各组加入内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂；荧光定量PCR检测破骨细胞特异性酶抗酒石酸酸性磷酸酶 mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的变化。 结果与结论：①骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。②骨保护素的质量浓度与诱导生成的破骨细胞数量及其标志酶mRNA的表达量呈负相关，与破骨细胞凋亡率呈正相关。③骨保护素可以增加破骨细胞内一氧化氮的生成以及内皮型一氧化氮合酶活性的升高；骨保护素的质量浓度与破骨细胞生成的一氧化氮浓度及内皮型一氧化氮合酶活性呈正相关。④Raw264.7细胞在体外培养条件下，骨保护素与一氧化氮在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用，推测两者之间可能存在骨保护素/内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮信号通路。