抗凝血纳米壳聚糖微球的合成、表征及生物安全性评价

摘要

背景：有研究显示，壳聚糖等天然多糖经磺化改性后具有类似肝素的抗凝功能，因磺酸化后的壳聚糖其形成的磺酸根基团与肝素的活性基团相似，具有良好的抗凝血性。目的：制备具有抗凝血功能的纳米壳聚糖微球，检测其形态结构、理化性能及生物安全性。方法：利用乳相法合成纳米壳聚糖微球，通过磺化反应合成磺酸化壳聚糖微球，通过透射电镜描述其形态特征，红外光谱观察其特异基团峰值变化。①凝血实验：分别将肝素、纳米壳聚糖微球及10，30，50 mg磺酸化壳聚糖微球加入SD大鼠血中，检测凝血指标。②溶血实验：分别将去离子水、生理盐水及10，30，50 g/L磺酸化壳聚糖微球浸提液加入兔2%红细胞悬液中，检测溶血率。③细胞毒性实验：分别采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基及10，30，50 g/L磺酸化壳聚糖微球的浸提液培养人脐静脉血管内皮细胞，72 h后检测细胞相对增殖率及毒性分级。结果与结论：扫描电镜显示磺酸化壳聚糖微球具有良好的形态结构，粒径大小50 nm，红外图谱提示存在磺化取代。体外凝血实验表明磺酸化壳聚糖微球具有显著抗凝血作用，抗凝血效果呈剂量效应关系。磺酸化壳聚糖微球符合国标关于溶血率小于5%的安全标准，无致溶血性。细胞毒性实验表明磺酸化壳聚糖微球浸提液无明显细胞毒性，其生物安全性符合国家标准。