源于体外培养胰岛中表达Ngn3的细胞是胰腺内分泌前体细胞的新证据

摘要

目的评估表达Ngn3的细胞对成体胰岛维护和更新的作用及其意义.方法用6～8周龄的C57BL/6小鼠分离胰岛.胆总管内插管成功后,切除胰腺组织并用浓度为2.5 mg/ml胶原蛋白酶V灌注消化.手工拣取胰岛后, 置于60 mm培养皿内,每个培养皿内含10～12个胰岛,用RPMI-1640(12.5 mmol/L HEPES, 5.2 mmol/L 葡萄糖和 2% 胎牛血清)培养液培养.用A6抗体, 胰岛素抗体,胰高血糖素抗体,Nestin抗体, Ngn3抗体和 5′-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo- 2′-deoxy-uridine,BrdU)抗体进行胰岛细胞免疫荧光染色.结果在增殖的胰岛细胞中,只有不到15%的细胞表达Ngn3,其中约有30%以上的细胞同时表达A6.在培养的胰岛细胞中存在表达Ngn3的细胞,这一结果与其他在胚胎发育和成体胰岛中的研究结果一致.本研究发现培养的胰岛细胞中存在同时表达A6和Ngn3的细胞.A6被认为是可分化为胆管上皮细胞的肝脏前体细胞的标记物.胰岛内表达A6的细胞可能来源于成体胰管,并迁移至胰岛内.细胞表达A6的同时表达Ngn3,表明这些细胞在胰岛内可分化为内分泌细胞.结论培养的胰岛细胞中发现共同表达Ngn3 和A6 的细胞,表明胰岛内的4种内分泌细胞可能来源于成体胰岛中的同一内分泌细胞系.A6 和 Ngn3是对胰岛内成体干细胞研究很有帮助的标记物.这可以让我们进一步了解IPC的增殖和分化,并且有可能通过胰岛内成体干细胞来治疗糖尿病.