RNA干扰技术靶向SMYD3基因治疗肝癌的实验研究

摘要

目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)编码基因的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒,并研究其对肝癌细胞的作用.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测SMYD3 mRNA在肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC7721的表达.构建重组SMYD3 shRNA表达质粒Pgenesil-1-s,并采用介导转染法导入HepG2细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测阻抑效应,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.建立人肝癌细胞HepG2皮下移植瘤裸鼠模型,注射Pgenesil-1-s,动态观察肿瘤体积并于2周后处死裸鼠称取瘤重.结果肝癌细胞株HepG2、Hep3B 、SMMC7721的SMYD3 mRNA表达水平显著高于正常肝细胞株L-02;Pgenesil-1-s转染HepG2细胞后,SMYD3 蛋白表达明显下调,而且细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑;经重组质粒治疗14 d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.01).结论肝癌细胞高表达SMYD3,shRNA干扰特异性抑制SMYD3表达,可以促进肝癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植瘤的生长.