尼古丁诱导口腔癌前病变细胞中E26转录因子1与过氧化物还原酶1的相互作用

摘要

目的研究尼古丁诱导口腔癌前病变细胞中E26转录因子1（E26 transformation specific 1,Ets1）与过氧化物还原酶1（peroxiredoxin 1,Prx1）的相互作用,探讨尼古丁在口腔癌前病变中作用的分子机制。方法培养口腔癌前病变细胞株（dysplastic oral keratinocyte,DOK）,实验分为尼古丁组、对照组、敲低组和敲低对照组,尼古丁组、敲低组和敲低对照组DOK细胞用1μmol/L尼古丁处理7 d,对照组不作任何处理。分别采用蛋白质印迹法、免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）和染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,ChIP）法检测尼古丁组和对照组DOK细胞中Prx1和Ets1的蛋白表达量、Prx1和Ets1蛋白结合量以及Ets1与过氧化物还原酶1基因（PRDX1）启动子区的结合情况。分别利用siRNA干扰和慢病毒感染技术敲低Ets1和Prx1,蛋白质印迹法检测敲低组和敲低对照组DOK细胞中Prx1和Ets1的蛋白表达变化。结果尼古丁诱导Prx1和Ets1蛋白表达显著增加,尼古丁组Prx1和Ets1蛋白相对表达量分别为0.71±0.02和0.12±0.01,均显著高于对照组中二者的表达（Prx1和Ets1蛋白分别为0.53±0.06和0.01±0.01,P=0.009,P=0.000）。Co-IP结果显示,Prx1能与Ets1形成蛋白复合体,尼古丁组Prx1和Ets1蛋白结合量高于对照组。ChIP检测发现,尼古丁可显著上调Ets1与PRDX1基因启动子区的结合,尼古丁组富集倍数（80.9±19.7）显著高于对照组（13.8±1.2）（P=0.004）。在DOK细胞中,成功敲低了Ets1和Prx1蛋白的表达,敲低组Ets1和Prx1蛋白相对表达量分别为0.60±0.06和0.48±0.03,敲低对照组分别为0.83±0.08和0.80±0.06（P=0.016,P=0.002）。敲低核转录因子Ets1可显著抑制Prx1蛋白表达（P=0.002）;反之,敲低Prx1亦可显著降低Ets1蛋白的表达（P=0.000）。结论在口腔癌前病变细胞中,Ets1可直接调控Prx1的表达,与Prx1蛋白存在相互作用;尼古丁可能通过放大Ets1与Prx1之间的正反馈调控信号,促进口腔癌前病变的发生和发展。