基因成像体外监测人肿瘤坏死因子相关的诱导凋亡配体基因在肺癌A549细胞中表达的实验研究

摘要

目的应用作者构建的同时携带人肿瘤坏死因子相关的诱导凋亡配体（hTRAIL）基因和萤火虫荧光素酶（luc）基因的腺病毒双表达载体（Ad-hTRAIL-luc）,以luc为报告基因,体外监测hTRAIL基因的表达及其作用。方法携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的腺病毒载体（Ad-EGFP）以不同感染复数（MOI）感染肺癌A549细胞,48 h后检测腺病毒载体的感染效率。Ad-hTRAIL-luc分别以不同MOI感染A549细胞,用流式细胞仪48 h后分别检测hTRAIL的表达率及A549细胞的凋亡率;用液闪计数仪检测荧光素酶发光的每分钟计数（cpm）。携带luc基因的腺病毒载体（Ad-luc）以不同MOI感染A549细胞,48 h后检测荧光素酶发光的cpm值。Ad-hTRAIL-luc转染A549细胞后,对各组细胞的hTRAIL表达率及细胞凋亡率结果（自然对数转换后）、cpm值结果进行完全随机设计资料的方差分析,并对hTRAIL表达率及细胞凋亡率的2组数据进行直线相关分析。对Ad-EGFP感染后阳性率及Ad-luc感染后cpm值进行完全随机设计多样本比较的秩和检验。结果Ad-hTRAIL-luc转染A549细胞后,各组hTRAIL基因的表达率经自然对数转换后分别为（2.37±0.04）%、（3.16±0.03）%、（3.64±0.03）%、（3.96±0.02）%、（4.24±0.02）%、（4.34±0.02）%,各组间差异具有统计学意义（F=7364,P＜0.01）,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;将各组细胞凋亡率进行自然对数转换后分别为（1.52±0.04）%、（2.93±0.02）%、（3.39±0.02）%、（3.64±0.02）%、（3.86±0.02）%、（4.08±0.02）%、（4.20±0.02）%,各组间差异具有统计学意义（F=12456.7,P＜0.01）,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;各组细胞检测到的cpm值分别为465 561±26 801、1 038 576±29 417、937 655±23 197、786 432±20 028、524 288±16 338、401 566±15 961,各组间差异具有统计学意义（F=1315.94,P＜0.01）,差异两两比较均有统计学意义（P＜0.01）。hTRAIL基因的表达率和A549细胞的凋亡率之间存在相关关系（r=0.984,P＜0.01）。结论腺病毒双表达载体Ad-hTRAIL-luc可有效将luc及hTRAIL基因传递到肺癌A549细胞中,从分子或细胞水平研究生物体的变化和疾病的进展,监测基因表达及疾病疗效。