人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在家蚕中的表达与鉴定

摘要

目的 以家蚕为生物反应器表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),并检测其生物学活性.方法 将人TRAIL(93～281aa)基因重组于质粒pBacPAK8构建重组转移载体pBacAK8-TRAIL.与经线性化修饰的家蚕棱型多角体病毒(BmBacPAK)DNA共转染家蚕培养细胞株BmN,获得了插入TRAIL基因的重组病毒,重组病毒感染家蚕细胞和家蚕幼虫,使其表达人TRAIL.结果 Southern杂交表明重组病毒基因组中含有人TRAIL基因片段,RNA斑点杂交表明人TRAIL基因得到了转录,重组病毒感染家蚕细胞株(BmN)、家蚕幼虫,在细胞培养上清、细胞抽提物、幼虫的体液样品中通过Westblot分析都能检测得到表达产物的特异性条带;采用L929细胞检测TRAIL的生物学活性.结论 提示人TRAIL基因分别在家蚕培养细胞和蚕幼虫中得到高效表达,此基因杆状病毒表达系统的建立为进一步研究TRAIL奠定了基础.