人乳腺癌转移抑制基因真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的构建乳腺癌转移抑制基因（BRMS 1）的真核表达载体pcDNA3.1（-）B/myc-BRMS1,为进一步研究恶性肿瘤的转移机制及基因治疗提供物质基础。方法常规方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,Trizol法提取细胞株总RNA;设计一对特异性引物,经过逆转录反应获得BRMS1 cDNA的CDS序列,连接到质粒pcDNA3.1/myc-His（-）B上,构建BRMS 1的真核表达载体pcDNA3.1（-）B/myc-BRMS1,行基因测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK-293,行Western blot验证其是否表达。结果重组质粒pcDNA3.1（-）B/myc-BRMS 1经双酶切及基因测序分析,验证了克隆的人BRMS 1基因cDNA序列与GenBank[AF159141]公布的人BRMS 1基因的cDNA序列吻合,重组体pcDNA3.1（-）B/myc-BRMS 1中插入的目的基因BRMS 1是正向、单倍插入。结论成功构建了BRMS 1真核表达载体pcDNA3.1（-）B/myc-BRMS 1,为深入研究BRMS 1基因功能和BRMS 1基因治疗奠定了物质基础。