牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立

摘要

为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的恒温隔绝式荧光PCR (iiPCR)方法,本研究采用文献报道的引物和探针,通过优化反应体系,首次建立了检测IBRV核酸的iiPCR方法.结果 显示该方法仅特异性检测出IBRV,而对牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛腺病毒3型、牛冠状病毒、牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌等病原则不能检出.该方法的检测下限为2.4拷贝/μL质粒标准品,并具有良好的重复性.对临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR方法的检测结果一致;该方法配合PetNAD核酸萃取试剂盒,从核酸提取到报告检测结果仅需1h,具有操作简便、快速、可现地化的特点.对9个省29份商品化冻精检测结果显示,IBRV阳性率为24％(7/29),表明我国流通的商品化冻精携带IBRV情况普遍.本研究为IBRV的现地检测提供了一个可靠的方法.