摘要：
为鉴别检测引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原,包括牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒(BPIV),本研究分别以IBRV g B基因、BVDV 5′-UTR基因、BRSV N基因和BPIV HN基因为靶基因,通过BLAST比对,基于靶基因的保守区域设计引物,经过反应体系优化,建立了检测IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的单一和多重SYBR GreenⅠ实时PCR方法。结果显示,建立的方法检测灵敏性高,对IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的最低检测限分别为5.86×10^(1)、5.02×10^(1)、1.02×10^(2)和2.42×10^(1)copies/μL。检测特异性强,仅IBRV、BVDV、BRSV和BPIV为方法阳性,其他病毒均为阴性。采集了259份临床表现为呼吸道疾病症状的牛血液样本,利用建立的方法进行检测,结果显示,阳性检出率分别为BVDV 22.78%、BPIV 11.97%、IBRV 5.02%、BRSV 31.66%,经基因测序复核,本方法的检测准确率为100%。此外,在阳性样本中存在多种病毒混合感染的情况,其中BRSV和BVDV混合感染率为5.02%,BRSV和BPIV混合感染率为3.47%,BPIV和BVDV混合感染率为1.93%,BRSV和IBRV混合感染率为1.16%,BRSV、BVDV和BPIV混合感染率为0.39%。以上结果表明,本研究建立的方法具有良好的检测灵敏性、特异性和准确性,可同时检测IBRV、BVDV、BPIV和BRSV,为病毒性牛呼吸道疾病综合征主要病原的快速检测和流行病学调查提供了必要的技术支持。
