H3N8亚型马流感病毒间接ELISA抗体检测方法建立及应用

摘要

为建立马流感血清学ELISA诊断方法,本研究以马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)通过SPF鸡胚培养和增殖,收取含病毒尿囊液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为ELISA包被抗原,首次在我国建立了检测H3N8亚型马流感抗体的间接ELISA诊断方法.试验的最佳反应条件为:最佳抗原稀释度7g/mL,封闭液5%脱脂乳,血清稀释度1:100,二抗稀释度1:10 000,稀释液PBS(pH7.4),血清反应时间1.5 h,二抗反应时间1 h.通过本方法对555份临床样品进行检测并与血凝抑制(HI)试验检测结果比较,证明本方法特异、敏感,具有良好的稳定性和可重复性,适于马流感的流行病学调查和监测工作.