重组囊素肽的构建表达及其对禽流感灭活苗免疫效果的影响

摘要

为重组表达不同拷贝串联囊素(BS)活性肽及评价其对禽流感灭活苗的免疫效果,本研究以囊素五肽和三肽的氨基酸序列为基本单元,设计了3种不同串联方式的囊素肽,按照大肠杆菌偏爱密码子设计其引物,利用SOE-PCR技术扩增了3种囊素肽编码基因,分别克隆至pET-32a中,构建重组质粒pET-BS1、pET-BS2和pET-BS3,并转化于大肠杆菌OrigamiTMB中诱导表达.SDS-PAGE和western blot结果表明,3种重组囊素肽BS1、BS2和BS3均以可溶形式表达,与天然囊素肽具有相似的免疫原性.将3种重组囊素肽分别与禽流感灭活病毒联合免疫雏鸡,免疫效果检测表明,与单独免疫灭活病毒组相比,3种重组囊素肽均能够明显促进鸡血清中抗体产生,提高外周血淋巴细胞增殖能力;但仅BS1能够同时提高血清中IL-4和IFN-γ的含量.本研究通过原核表达制备了3种具有良好免疫活性的重组囊素肽,为其作为免疫增强剂提供了实验依据.