牛病毒性腹泻病毒E0基因重组慢病毒载体构建和鉴定

摘要

为构建携带牛病毒性腹泻病毒(BVDV) E0基因的重组慢病毒质粒,并检测其在HEK-293T细胞中的表达,本研究通过合成BVDV E0基因序列(AJ133739.1),构建包含IgK信号肽的pZJ-CMV-eGFP-IgK-E0重组质粒和不合信号肽的pZJ-CMV-eGFP-E0重组质粒,将其采用PEI方法分别转染HEK-293T细胞包装慢病毒,并浓缩后测定滴度,收集转染后上清液进行western blot检测蛋白表达.通过酶切、PCR及测序鉴定表明E0基因正确整合至慢病毒载体中,western blot结果表明其能够在HEK-293T细胞中表达.本研究构建获得携带BVDV E0基因的重组慢病毒,为BVDV E0蛋白哺乳动物细胞中的表达及其免疫原性研究奠定基础.