鸡马立克氏病强弱病毒株PCR鉴别检测方法在诊断中的应用评价

摘要

为在现地准确诊断鸡马立克氏病(MD)以及区分发病鸡中MD病毒(MDV)野毒株和疫苗株的感染,本研究选择MDV血清1型(MDV-1)基因组中两个特有的、强弱毒株存在序列差异的基因片段132 bp重复序列(132 bpr)和meq基因作为靶基因,建立了MDV的PCR检测方法.特异性试验和敏感性试验表明该PCR方法特异性强,敏感性高,132 bpr和meq基因两对引物对阳性重组质粒的检测下限分别为1.0×103拷贝/μL和1.0×102拷贝/μL.通过对近10年的1057份临床样品的检测对该PCR方法进行应用评价.结果表明病毒分离与PCR检测结果的符合率为100％,PCR检测结果可信度高;琼脂扩散试验(AGP)对MDV PCR检测阳性样品的检测阳性率为86.25％,PCR法检测敏感性明显高于AGP法.此外,对分离病毒株meq基因序列分析结果表明,所有分离株均具有中国野毒株特征,即突变主要出现于其编码蛋白的6个氨基酸中(K77E、D80Y、V115A、T139A、p176R或p217A),表明该PCR检测方法具有良好的特异性.本研究建立的MDV PCR检测方法特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,可以用于MD的临床诊断.