胰酶快速消化大鼠皮层神经细胞原代培养方法分析

摘要

目的 探索更简易可行的原代神经细胞培养方法.方法 在文献报道方法的基础上,注射器抽吸制备神经细胞匀浆,0.125%胰酶(含0.2‰EDTA)短时消化脑组织3~5 min,加入含10% 胎牛血清的DMEM培养液,接种于经多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)预处理的六孔板上,24 h后加入终浓度为10 μM的阿糖胞苷(arabinofuranoside cytosine,Ara-C) 抑制胶质细胞生长,48 h后更换培养液终止Ara-C的作用.以后每2~3 d更换培养液,神经细胞在含95% CO2培养箱中培养7 d后,用神经元特异烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)染色鉴定神经元纯度.结果 培养细胞成熟后,神经细胞生长良好,NSE染色鉴定证实,神经元纯度超过95%.结论 改良后的胰酶快速消化原代神经细胞培养方法,可减少实验动物用量,减少细胞损伤及污染机会,方法确切可行.