人脂肪组织来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定方法的实验研究

摘要

目的 探讨人脂肪组织来源的内皮祖细胞的分离、培养及鉴定的方法.方法 脂肪抽吸术获取人体脂肪组织,消化法得到的细胞接种在Fibronectin包被的培养皿内,用含2%胎牛血清的DMEM培养,传至第2代,分诱导组(EGM-2,2%FBS,VEGF,bFGF等)和非诱导组(DMEM,2%FBS)两组进行培养.免疫细胞荧光分别检测两组的CD34、vWF和PECAM-1表达;流式细胞仪分别检测两组的CD34、CD45、CD133和PECAM-1表达率;荧光显微镜观察细胞摄取DiI-ac-LDL的功能;诱导组细胞接种于甲基纤维素半固体培养基进行三维培养,观察血管样结构形成情况.结果 诱导组细胞12 d后呈现内皮细胞典型的铺路石样形态,未诱导组细胞未观察到这种变化;免疫细胞荧光显示诱导组vWF、PECAM-1表达阳性,未诱导组细胞CD34表达阳性;流式细胞仪检测显示诱导组PECAM-1阳性率为(67.41±13.35)%,明显高于非诱导组的(6.73±2.21)%(P＜0.01),非诱导组CD34阳性率为(72.39±13.45)%,明显高于诱导组的(16.06±3.86)%(P＜0.01);荧光显微镜观察显示诱导组细胞具有摄取DiI-ac-LDL的功能;诱导组细胞三维培养形成"树枝样"分叉结构.结论 建立了一种从人脂肪组织分离、培养EPCs的方法,并对其表型进行鉴定,有望为血管组织工程提供新的种子细胞来源.