铃蟾肽致小鼠瘙痒下丘脑响应及PKA/creb信号参与机制

摘要

目的研究铃蟾肽(BN)致瘙痒药理学作用特点,确定下丘脑参与其中枢调控瘙痒关键分子机制。方法观察KM小鼠经侧脑室注射不同剂量BN(0.04,0.40和4.00μg)诱发的瘙痒效应;构建耦联荧光标签NBD(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole)的BN(NBD-BN),并通过检测荧光信号示踪NBDBN在脑内的分布;利用免疫组化和Western印迹法检测下丘脑BN受体神经介素B受体(NMBR)、胃泌素释放肽受体(GRPR)及受体信号PKA/CREB相关蛋白的表达,鉴定下丘脑内特异神经元c-FOS蛋白响应。结果KM小鼠经侧脑室注射BN(0.04,0.40和4.00μg)后,30 min观察期内产生显著瘙痒抓挠行为,抓挠次数呈剂量依赖性增加。与对照组相比,BN 3个剂量组抓挠次数均显著增加(P<0.05,P<0.01);荧光示踪结果显示,侧脑室给予BN后NBD-BN在30 min内在下丘脑特异性分布,且10 min时荧光强度达到峰值。免疫组化和Western印迹结果显示,BN 2种受体亚型GRPR和NMBR在下丘脑特异性分布;侧脑室给予BN 4.00μg后,与对照组相比,下丘脑PKA,p-CREB和c-FOS蛋白均显著增加(P<0.01),且c-FOS蛋白在下丘脑背内侧核密集分布。结论BN具有强的中枢致瘙痒作用,侧脑室注射BN可致小鼠瘙痒并激活下丘脑BN受体依赖的PKA/CREB信号通路,诱导下丘脑神经元响应,表明下丘脑参与调控BN中枢致瘙痒作用。