基于TRPV1探讨辣椒素促进胃癌转移机制

摘要

目的 探究辣椒素受体(TRPV1)在辣椒素介导的胃癌转移过程中对胃癌细胞转移及运动能力的作用及其机制.方法 ①利用荧光素酶标记的胃癌细胞构建胃原位及尾静脉转移瘤模型,通过小动物成像仪在整体动物水平观察辣椒素对胃癌转移的影响;②通过划痕、Transwell及3D侵袭实验,在细胞层面检测辣椒素对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;③结合KM plotter生存曲线分析、免疫荧光、q-PCR和Western印迹法验证TRPV1在辣椒素介导的胃癌转移过程中的作用;④利用CRISPR-Cas9技术敲除胃癌细胞TRPV1基因,通过体内外实验观察TRPV1的缺失对辣椒素促胃癌转移作用的影响;⑤长时间动态活细胞观察成像仪结合细胞示踪软件观察胃癌细胞运动能力;⑥微流控芯片检测技术观察胃癌细胞变性能力.结果 ①与模型对照组相比,辣椒素100 mg·kg-1组小鼠胃癌转移率及肝转移结节数显著增加;②与溶剂对照组相比,辣椒素4,8和16μmol·L-1处理后,胃癌细胞迁移、侵袭及运动能力显著增加,且呈剂量依赖性;③TRPV1在胃癌中异常高表达,且与胃癌患者生存期呈显著负相关.辣椒素能够促进TRPV1 mRNA及蛋白水平表达,同时促进TRPV1下游相关蛋白表达;④胃癌细胞中TRPV1基因的缺失导致辣椒素介导的胃癌转移增加过程被显著抑制;⑤辣椒素促进胃癌细胞运动能力及变形能力增加,TRPV1的表达缺失使辣椒素的促胃癌细胞运动能力及变形能力被显著削弱.结论 辣椒素通过促进胃癌细胞上TRPV1蛋白表达及功能发挥,促进胃癌细胞变形及运动能力增加,进而加速胃癌转移过程.