利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人类UGT1A6

摘要

目的获得单一有活性的人类UGT1A6重组酶,以进一步研究经该酶催化的底物谱及其在对底物作用的过程中与其他同工酶之间的相互作用.方法利用细菌/杆状病毒系统,将构建的pFsatBac-UGT1A6重组质粒转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过转座作用获得重组粘粒Bacmid,将其转染草地夜蛾细胞(Sf9)后,产生重组杆状病毒.该病毒再感染Sf9细胞,即可获得人类UGT1A6重组酶.该酶的活性以4-硝基酚为底物,用高效液相色谱法分析鉴定.结果利用细菌/杆状病毒系统,人类UGT1A6重组酶得到表达,且其对4-硝基酚的Km值为(0.36±0.05)mmol·L-1,Vmax值为(13.1±1.0)mmol·min-1·g-1蛋白.结论利用细菌/杆状病毒系统可获得对4-硝基酚有代谢活性的人类UGT1A6重组酶,该酶可进一步用于其他底物的Ⅱ相代谢研究.