吡格列酮对谷氨酸诱导的皮质神经元损伤的保护作用

摘要

目的 观察吡格列酮对谷氨酸所致培养皮质神经元损伤的保护作用及其机制.方法 乳大鼠大脑皮质神经元,培养7 d后用于实验.实验分为对照组,加入0.1%二甲亚砜;谷氨酸损伤组,加入谷氨酸100 μmol·L-1作用2 h或24 h;吡格列酮组,先分别加入吡格列酮0.01,0.1和1 μmol·L-1作用1 h,然后加入谷氨酸;谷氨酸 + 吡格列酮+GW9662组,先加入GW9662 10 μmol·L-1作用30 min,然后加入吡格列酮1 μmo·L-1, 作用1 h后加入谷氨酸.MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测Bcl-2蛋白、钙蛋白酶Ⅰ蛋白和磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)表达水平;免疫荧光染色法检测钙蛋白酶Ⅰ及磷酸化活化转录因子2(ATF2)表达.结果 谷氨酸作用24 h可使体外培养神经元细胞存活率明显下降,从对照组的(100.0±15.4)%降低至(71.5±6.1)%;细胞凋亡百分率明显加,从对照组的(8.7±1.3)%增加至(35.4±6.9)%;磷酸化JNK1、钙蛋白酶Ⅰ蛋白和磷酸化ATF2表达增加,Bcl-2蛋白表达水平降低.吡格列酮0.1及1 μmol·L-1明显对抗谷氨酸引起的神经元损伤,神经元细胞存活率分别为(91.1±4.7)%和(96.6±3.4)%;细胞凋亡百分率分别为(15.5±3.8)%和(9.2±0.9)%.过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662不能拮抗吡格列酮对神经元的保护用,谷氨酸+吡格列酮+ GW9662组细胞存活率为(91.3±6.7)%,细胞凋亡百分率为(10.2±1.8)%.单独应用GW9662 10 μmol·L-1对细胞存活率和细胞凋亡百分率没有影响.吡格列酮也可抑制谷氨酸引起的磷酸化JNK1、磷酸化ATF2、钙蛋白酶Ⅰ表达增多及Bcl-2蛋白表达减少.结论 吡格列酮对谷氨酸引起的培养皮质神经元损伤具有明显的保护作用,可能与吡格列酮抑制磷酸化JNK1和钙蛋白酶Ⅰ表达,以及强Bcl-2蛋白表达有关,与PPARγ激活无关.